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Cría de larvas de pez cebra

Los laboratorios de investigación de todo el mundo crían peces cebra desde que son huevos con una supervivencia bastante alta. Algunos, como el ZIRC, el Zebrafish International Resource Center de la Universidad de Oregon, que es la referencia mundial en el uso de  pez cebra en investigación,  incluso publican sus protocolos en internet (Zirc). Un protocolo es  como una receta de cocina en la que dices pasito a pasito como haces algo, como si apuntaras en un libro como hace tu  abuela los macarrones para luego hacerlos tú. En este caso ellos cuentan cómo  crían a sus larvas. Pero claro, un laboratorio de investigación tiene todo muy controlado y tiene ingredientes que vosotros no tenéis o os costaría mucho tener.

Un objetivo de este  proyecto es  que vosotros también seáis capaces de criar peces desde que son huevos en vuestra clase o en vuestra casa. No creo que tengáis las cosas tan controladas como en el ZIRC, así que va a haber que adaptar un poco la receta. Y siento deciros que aún no tengo una receta mágica infalible para hacer esto, como tampoco tienen los médicos la cura del Alzheimer (aún).  Así que hay dos opciones: o nos rendimos y decimos que no se puede criar peces en ambiente escolar y no se puede curar el cáncer o investigamos como hacerlo. Y yo de rendirme no soy. 

En esta sección del blog,  voy a ir escribiendo que receta es la que voy viendo qué mejor funciona. Pero igual que la ciencia avanza, esta receta irá  mejorándose poco a poco. Y será una suma de aportaciones de mucha gente.  Al final del post encontraréis un apartado que se llama bibliografía. En ciencia siempre hay que citar las fuentes, tienes que decir en qué trabajos previos te basas para decir algo. Si hacéis click en los nombres que os vais a ir encontrando entre paréntesis a lo largo del texto, os remitirá al punto exacto donde explica de dónde viene esa información. 

Tú o tu colegio también me podéis ayudar a mejorar esta receta. En la última parte os planteo posibles dudas o mejoras que os pueden inspirar para plantear pequeños experimentos en clase. Contacta conmigo para que te ayude a diseñarlos.   Luego puedo publicar los resultados en forma de póster científico en  mi blog. Y si has hecho cosas distintas que te han funcionado mejor, te animo a dejar un comentario en esta entrada. Y así entre todos llegaremos a esa receta mágica como científicos verdaderos.

Compra huevos de pez cebra y observa con tus propios ojos como se forma un ser vivo

El musgo de Java, una casa ideal para nuestras larvas 

Actualización realizada en noviembre de 2019.

El musgo de Java, Vesicularia dubyana,  es una planta originaria del Sudeste asíatico, de mantenimiento sencillo. 

Desde que la descubrí comprendí que esta planta iba a ser el mejor aliado para criar a nuestras larvas. Entre sus intrincadas hojas, las larvas encuentran protección y alimento. Si ponemos una gotita de leche cuando Danio es aún un huevo estimularemos que se formen un montón de infusorios, protozoos que les “caben en la boca” a nuestras larvas y les sirven de primer alimento. Además, también podemos encontrar otros “bichitos” más grandes, como nematodos,  minigusanitos que les alimentarán en fases posteriores. 

El musgo de Java, también realiza una función beneficiosa propia de las plantas de acuario:

  1. Absorbe el amoniaco, ya que lo utiliza como fuente de nitrógeno. Esto nos ayuda a tener los tuppers limpios de amoniaco, principal causa de mortalidad de las larvas entre los días 14 y 21. 
  2. Protege de metales pesados del agua. 
  3. Inhibe el crecimiento de las algas, 
  4. Estabiliza el pH
  5. Oxigena el agua 
  6. Elimina el exceso de CO2 

Puedes ampliar información sobre los efectos beneficiosos de las plantas en el libro de D. L. Walstad “Ecology of the Plantede Aquarium” una guía imprescindible si quieres entender cómo funciona un acuario y las relaciones entre los seres vivos que lo habitan, de una manera amena pero científicamente rigurosa. 

Actualmente en Villapez y en colegios que están realizando el proyecto de “Danio en clase”, nos encontramos testeando las enormes posibilidades de esta planta en la cría de larvas de pez cebra, con diferentes combinaciones de alimentos. En los experimentos de octubre tuvimos unas viabilidades muy buenas con este método. 

Hemos probado a añadir unas gotas de leche para aumentar los infusorios unos días antes de añadir las larvas (Triton) pero hemos visto una disminución de la viabilidad los primeros días (Instituto Bideberri BH, Villapez, Dorleta Aitzelai) . Quizá sea porque el medio se contamina en exceso. 

También hemos visto que entre las ramas del musgo algunas larvas se “pierden” (Colegio Igeldo) y hemos probado a separar el musgo con bolsas de té (Villapez), o con mallas agujereadas (Museo Mudic, Orihuela). No hemos visto una mejora en la viabilidad de esta manera. 

También estamos probando otras plantas como la cola de zorro (Ceratophyllum demersum) con la que es más fácil localizar a las larvas, porque tiene menos recovecos. 

Las viabilidades que hemos obtenido en invierno han sido peores que en otoño. No sabemos si es por la planta o por la temperatura. En Alicante hay ahora 19-20 grados de temperatura ambiente y eso para una larvita de pez cebra es muchísimo frío. 

Protocolo de cría de larvas de pez cebra.

( o receta mágica para transformar un huevo en pez)

Las mayores viabilidades hasta la fecha las hemos conseguido con la siguiente fórmula: tupper de 200-300 ml de agua Fontvella, temperatura ambiental de 30ºC, cambio diario de agua de un 20% y alimentación del 4º día al 21º con Gema 75 y del 21-mes y medio con Gema 150 (Gema, es una comida usada en laboratorio para alimentar al pez cebra).  En estas condiciones conseguimos un 80% de viabilidad de las larvas. 

Hacia el día 14-21 hay un pico de mortalidad en las larvas, que coincide con el paso de la respiración cutánea a la branquial. En este tiempo con estas condiciones, los tuppers están con una carga alta de amoniaco. El amoniaco lesiona para las branquias de los peces, por lo que estos no pueden respirar. Antes de los 14 días la respiración es cutánea. Para evitar la acumulación de amoniaco estamos probando unas betteras con dos litros de agua, donde el amoniaco se diluye más y permite hacer cambios de agua de manera sencilla añadiendo agua con un vaso y recogiendo lo que rebosa en la parte trasera. Además le hemos acoplado un pequeño calentador de 8 wattios  nos permite llegar a una temperatura de 30ºC, que es donde hemos observado mayor viabilidad. 

  • Nada más eclosionar las larvas, añadid unos 100-200 ml de agua Fontvella a un tupper. Estamos probando a aumentar el volumen de agua para que el amoniaco se diluya  (Igeldo) 
  • Añadid  a este tupper el musgo de java o cola de zorro y 25 larvas recién eclosionadas. (Experimentos de Villapez).
  •  Alimentar con pequeñas cantidades de Sera Micron. Hacer cambios parciales de agua cada dos días eliminando la suciedad. Es muy importante que el agua esté completamente limpia para que los restos de alimento no se degraden a amoniaco. 
  •  Mantener por encima de los 24 grados. Las mayores viabilidades las hemos obtenido a 30ºC. En el verano alicantino eso es fácil de obtener, pero cuando llega el invierno la viabilidad baja. Estamos probando un calentador de 7 wattios que calienta el agua de una bettera de dos litros exactamente a 29-30 grados con una temperatura ambiental de 19-20 grados. De momento tenemos unos buenos resultados pero está por llegar la fase crítica. 
  • Los animales han de comer todos los días, sobretodo en este primer mes, de manera que si estás en un colegio habrá que organizar turnos para llevarlos los fines de semana a casa. 
musgo de java
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Alimentación de larvas

Los animales que se reproducen por huevos tienen una bolsita de comida que les alimenta en sus primeras fases, llamada saco vitelino (Kimmel et al.). Pero cuando esta  reserva se agota, necesitan conseguir alimento del exterior. 

 Os voy a dar dos opciones: pienso seco Sera Micrón o alimento vivo Artemia salina. También los podéis combinar. Ambos los podéis conseguir en la tienda de Aprende con Danio.

¿Cuánto les damos y cuántas veces?:  Si no contamos con musgo de Java es importante seguir esta premisa: MUY POCO Y CUANTAS MÁS VECES MEJOR. Como referencia en el ZIRC, dan la cantidad de comida que puedan ingerir en 5 minutos, pero 4 veces al día. Igual no podéis llegar a tanto, pero seguir esta premisa: mejor más veces y poca cantidad. Mirad atentamente los vídeos para  ayudaros con las cantidades. Los restos de alimentos pudren el agua y eso puede matar a nuestras larvitas, así que tendremos que estar atentos a ir quitando los restos de alimento que sobre (Cayuela)

Sin embargo, en los Experimentos de Villapez, estamos observando que con ayuda del musgo de Java, es suficiente una toma al día, incluso pensamos que se puede llegar a espaciar más. Suponemos que esto se debe a que el alimento que añadimos para los peces, también alimenta a la microfauna que se encuentra entre el musgo y esta a su vez alimenta a los peces. Pero necesitamos más investigación para poder dar una pauta concreta sobre esto. 

También hemos visto que el efecto de la temperatura es importantísimo. En verano obteníamos viabilidades de un 70% con temperaturas rondando los 28ºC, que en invierno disminuyen a un 10-20% con temperaturas en torno a los 16ºC. 

Sera Micrón

Es una comida muy nutritiva y muy fina que permite que las mini-boquitas de las larvas la puedan tomar sin dificultad. Al echarlo tiene que quedar sin grumos en el agua. Os podéis ayudar de un papelito para eliminar los posibles grumos (Diaz)  

Artemia Salina

La Artemia salina es un crustáceo que forma quistes de resistencia cuando las condiciones son adversas. Con ayuda de un artemiero podemos eclosionar esos quistes o huevos y obtener nauplios de artemia, que es un alimento estupendo para nuestras larvas de peces. Además la Artemia es un animal  interesantísimo. 

A partir del día 14 podemos añadir Artemia salina al tupper con musgo de Java. Con una sola toma al día hemos visto un crecimiento adecuado de las larvas si esta planta está presente.

En el siguiente vídeo os muestro como “cocinar” este delicioso plato. 

 

La hora del “bocata”

Hacia los 20 días ya el Sera Micrón se les va a ir quedando corto y necesitan cambiar a una comida más consistente, como el Sera-vipagran baby. Necesitan su “bocata”.  Y ya será momento de ir planteándose como ir gestionando la mudanza a una casa mayor. (6)

Cambios de agua

Los restos de alimento, desechos de peces etc.. liberan al agua amoniaco, un compuesto tóxico para los peces. En ausencia de musgo de Java estos niveles se vuelven altamente tóxicos a los 3 días de haber iniciado la alimentación. Por ello es imprescindible ir haciendo cambios parciales de agua diariamente. En nuestros experimentos hemos visto que, en ausencia de musgo de Java,  eliminar 40 ml y añadir 50 ml de agua fresca funciona correctamente. 

Sin embargo, el musgo de Java, consume el amoniaco como fuente de nitrógeno, y nos puede permitir alargar los cambios de agua. En estos momentos estamos estudiando hasta qué punto podemos alargar estos cambios sin que se alteren las condiciones del agua. 

Calentitos mejor

El pez cebra es un pez tropical. Aunque el rango de temperatura que pueden tolerar de adultos es amplio y puede ir de 16 a 32 grados, lo cierto es que en estas primeras fases la supervivencia aumenta tremendamente  si la temperatura está entre 25 y 30ºC (Langa) pasando en mi experiencia de un 20% a 20ºC a un 80% A 27ºC. En sitios fríos esto es difícil de conseguir en invierno por muy fuerte que esté la calefacción. 

Por eso, en la tienda de Aprende con Danio, ofrezcemos el siguiente “invento” que consiste en un cristal  grueso de 5 mm al que se le acopla por debajo una manta de calentamiento de reptiles. Aunque no lleva termostato, la temperatura se mantiene en ese rango. Se puede jugar con la situación de las placas de petri en la manta para conseguir la temperatura más indicada. 

Cristal elevado

 

Además podemos poner el tupper con las junto con el artemiero, consiguiendo así que las artemias eclosionen mucho más rápido. 

De mudanza

Poco a poco nuestras larvas se irán transformando en alevines y tendremos que ir aumentando la cantidad de agua. Llegará un momento que el tupper se les que de pequeño y lo ideal sería pasarlos a un acuario. En próximos posts os explicaré cómo poner un acuario en marcha. 

Bibliografía

(1) Alumnos del Colegio Igeldo 

Realizaron un experimento en el que comparaban 3 tipos de casitas para peces, una placa, un tubo y un bote grande de conservas. Salió mejor el bote más grande. Cuanto más líquido mejor. Lee en este enlace su maravilloso póster. Son niñ@s de 3º-4º y 5º de primaria. 

(2) Consejo de Xavier Langa Oliva Responsable de la Unidad de pez cebra en la Universidad de Berna. 

(3) Kimmel et al. Stages of embryonic development of the zebrafish July 1995. 

(4) https://zebrafish.org/documents/protocols/pdf/Fish_Nursery/Nursery/Basic_Nursery_Instructions.pdf

(5) Eduardo Diaz Responsable de la Unidad de pez cebra del Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares. 

(6) Juan Ramos Mi “veterinario de peces” favorito. 

(7) Dra. María Luisa Cayuela, investigadora del Hospital Clínico Virgen de la Arrixaca. Le encantan los peces!

(8) Osborne N, et al. Report of a Meeting on contemporary topics in zebrafish husbandry and care. Zebrafish, 2016

(9) Diana Louise Walstad, Ecology of the planted aquarium: A practical Manual and Scientific Treatise. Echinodorus Publishing; Edición 3 (10 de junio de 2013)

(10) Tritón, Consejo en Portal Pez, corroborado por los Experimentos de Villapez.

(11) Experimentos de Villapez

 

Posibles mejoras 

*¿Será mejor alimentar a la las larvas SOLO con Artemia o solo con SERA MICRÓN o con ambos?

*¿Cuánto se pueden espaciar las tomas de alimento y los cambios de agua utilizando el musgo de Java?

*¿Qué pasaría sin en lugar de una manta eléctrica usamos una incubadora de huevos de pollitos?

*¿Es mejor usar una tupper de plástico o de cristal?

*Contacta conmigo si tienes otras sugerencias de mejora de este protocolo. 

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